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C18反相色谱柱的操作与清洗
发布时间:2019-04-29   点击次数:228次
C18反相液相色谱柱是一种常用的色谱柱产品,主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成,被广泛用于多个领域中。在c18反相液相色谱柱的使用中,保持色谱柱的柱效、容量和渗透特性,延长柱子的使用寿命非常重要。使用时间后就会出现柱压升高、柱效降低、峰形畸变和分离度降低、保留时间改变等变化,如不采取措施,将会缩短色谱柱的使用寿命,影响工作效率,并造成一定的经济损失。
 
C18反相色谱柱操作步骤:
 
1.平衡开始时将流速缓慢地提高,用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,则需要较长的时间来平衡)
2.如果使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水”过渡”即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡;分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。
 
C18反相色谱柱的清洗:
 
1、如果您的样品分析只用到一般的甲醇,乙腈和水的流动相(包括流动相里面加了点酸),在做完样品后可直接用65%的乙腈/水或者纯甲醇进行清洗40~60mins即可保存;
 
2、如果您的样品分析用到了含缓冲盐或者酸或者离子对试剂的流动相,在做完样品后的清洗必须按照下列2个步骤进行清洗柱子(不论您的柱子是否是可以过纯水的极性柱子还是一般的通用性柱子):
a、最重要的步骤——用5%的乙腈(甲醇)/水,清洗80ml溶剂以上(250mm色谱柱,150长度的柱子需要至少60ml溶剂清洗),1~2ml/min(根据时间自由调节流速;LC/MS柱子应以0.2ml/min的流速进行),如果因为时间来不及而清洗不了那么长时间,可以适当加大流速,比如1.5 or 2ml/min;
b、65%的乙腈(甲醇)/水或者纯甲醇/乙腈,清洗30~60mins,1~2ml/min。
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