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发布时间:2019-04-23   点击次数:384次
尺寸排阻色谱SEC)是一种分析技术,可以按尺寸并根据从填有多孔硅胶的色谱柱中洗脱的情况来分离已溶解的大分子,用于测量蛋白质绝对分子量、结构、大小及构成。
 
当 SEC 与光散射、粘度计以及浓度检测器相结合(称为三重检测)时,可测量绝对分子量、分子大小和特性粘度,并生成关于大分子结构、构象聚集与支化方面的信息。
 
通过使用 SEC 来测量分子量和其他特性,可以对蛋白质、合成聚合物和多糖类之类的天然聚合物等分子进行表征。 
 
尺寸排阻色谱的特点:
 
1.保留时间是分子尺寸的函数,有可能提供分子结构的某些信息。
2.保留时间短,谱峰窄,易检测,可采用灵敏度较低的检测器。
3.固定相与分子间作用力极弱,趋于零。由于 ,柱子不能很强保留分子因此柱寿命长。
4.不能分辨分子大小相近的化合物,相对分子质量差别必须大于10%能得以分离。
5.大分子的流程短,移动速度快,先流出色谱柱;小分子的流程长,移动速度慢,后流出色柱;而中等分子居两者之间。
6.生物相容性好,有很高的活性回收率。
 
尺寸排阻色谱柱的清洗:
 
多次使用后某些样品可能会吸附到入口筛板或填料上,当积累至一定程度时会出现压力升高并伴随峰型展宽的现象,此时需要清洗色谱柱。一般流程为:断开检测器,反接色谱柱,在低于50%较大推荐流速下用清洗液冲洗10-15倍柱体积。
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