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发布时间:2018-08-27   点击次数:1080次
氨基柱是同时可以用于正相和反相条件的一种色谱柱。但正相溶剂和反相溶剂是不互溶的,这一点不能忽略。对于新购柱子,首先请注意打开分析测试说明书,了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶,请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大,会导致柱压很高,适当调低流速。如果流动相中还有缓冲盐类,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,避免缓冲盐的析出。
柱效检测: 流动相:10%乙酸乙酯+90%正己烷 流速1.0
标准溶液:乙苯(或甲苯)+苯甲酸甲酯
检测波长254nm
这个方法特别适用于新购柱子(新购柱子往往保存在正相溶剂中)时即进行检测,如有问题,可及时与供应商沟通。
(1) 平时在正相条件下使用:
首先用50倍柱体积的异丙醇清洗,因异丙醇粘度较大需适当放低流速;之后,用50倍的甲醇清洗;之后,用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相,即可。
(2)平时在反相条件下使用:
缓冲盐应及时冲洗,不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等,属常识就不作特别交待。
用50倍纯甲醇冲洗;之后,用异丙醇过渡后,用二氯甲烷冲洗色谱柱;之后,再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。
这些清洗方法,主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法,色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。
一般C18或C8反相色谱柱,不能用纯水冲洗,有机相比例至少5%,否则键合相碳链会发生卷曲,导致色谱柱性能不稳定。
如果是正相柱,是肯定不能用水冲的,极少量的水都可能对色谱柱造成不可逆的损害。
其他柱,氨基柱由正相过渡到反相系统时,可以用碱性水溶液(pH不可过高,会水解)和纯水冲洗,氨基柱一般不用纯水,但可以用乙腈等的水溶液冲柱,但是不能长时间冲。氨基柱跟氰基柱在水相中都有水解问题,用在反相系统时需特别注意pH值。
氨基柱活化是指新装色谱柱在使用前要进行老化处理,其目的是取出残留的溶剂、水分和低沸点杂质,同时也使固定液在载体表面形成均匀的膜。
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